***

наш журнал - это подспорье работникам предприятий пищевой промышленности, производителям и поставщикам оборудования, сырья и ингредиентов

пятница, 5 апреля 2013 г.

ГОСТ Р ИСО 13493-2005: Мясо и мясные продукты. Метод определения содержания хлорамфеникола (левомицетина) с помощью жидкостной хроматографии

Дата введения — 2007—О1—О1 
1 Область применения 
Настоящий стандарт устанавливает метод определения с помощью жидкостной хроматографии содержания хлорамфеникола в мышечной ткани мяса, включая мясо птицы, где массовая доля хлорамфеникола составляет не менее 6,5 мкг/кг. 
Данный метод неприменим к испорченным образцам. 
Примечание — Настоящий стандарт допускается применять для определения содержания хлорамфеникола во всех видах мяса и мясопродуктов. Однако межлабораторные испытания по установлению точности метода были проведены только на образцах мышечной ткани. 

2 Нормативные ссылки 
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты: 
ИСО 3100-1:1991 Мясо и мясные продукты. Методы отбора и подготовки образцов. Часть 1. Отбор образцов 
ИСО 3696:1987 Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний ИСО 5725-1:1994 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения 
ИСО 5725-2:1994 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений 
3 Термины и определения 
В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением: 3.1 содержание хлорамфеникола в мясе и мясных продуктах: Массовая доля хлорамфеникола, измеренная с помощью метода, установленного в настоящем стандарте. 
Примечание — Содержание хлорамфеникола выражают в микрограммах на килограмм. 
4 Сущность метода 
Хлорамфеникол из пробы экстрагируют водой. Экстракт фильтруют и полученный водный раствор очищают от липофильных компонентов методом твердофазной экстракции. Хлорамфсникол элюируют с экстракционного патрона дихлормеганом. Органический растворитель выпаривают и остаток очищают с помощью жидко-жидкостной экстракции в системе вода-толуол. Хлорамфеникол определяют методом обращенно-фаэной хроматографии с детектированием в ультрафиолетовой (УФ) области спектра. 
5 Реактивы 
При отсутствии специальных указаний используют реактивы только признанных аналитических марок. 
5.1 Вода должна соответствовать требованиям квалификации не ниже 3-й степени чистоты согласно ИСО 3696. Вода не должна содержать органические примеси* 
5.2 Азот, пригодный для выпаривания растворителей. 
5.3 Дихлорметан. 
5.4 Толуол. 
5.5 Ацетатный буфер, с (СН3С02Ыа) = 0,01 моль/дм3. рН ■ 4.3. 
Растворяют 0,82 г безводного ацетата натрия примерно в 970 см3 воды. С помощью рН-метра (6*1) доводят рН до 4,3 добавлением раствора уксусной кислоты массовой долей 50 %. Переносят раствор в мерную колбу вместимостью 1000 сад\ Доводят водой до метки и перемешивают* 
5.6 Ацетонитрил дпя УФ спектроскопии. 
5.7 Подвижная фаза. 
К 250 см" ацетонитрила (5.6) добавляют 750 см3 ацетатного буфера (5*5) и тщательно перемешивают. 
Перед использованием элюент фильтруют через мембранный фильтр 0*22 мкм (6.2) и дегазируют. 5.6 Основной раствор хлорамфеникола массовой концентрации 100 мкг/смэ* Взвешивают 10 мг хлорамфеникола с точностью 0.1 мг и переносят навеску в мерную колбу вместимостью 100 см3. Добавляют метанол до метки и перемешивают* 
Приготовленный основной раствор стабипен в течение 1 мес при хранении в темноте. 5.9 Стандартные растворы хпорамфеникола* 
Пипеткой вносят 5*0 см3 основного раствора (5*8) в мерную колбу вместимостью 100 смэ. Разбавляют водой до метки и перемешивают. Разбавляют 1,0* 2,0, 5,0 и 15,0 см3 этого раствора до 100 см3 для получения четырех стандартных растворов с массовой концентрацией хлорамфеникола соответственно 0.05; 0,10; 0,25 и 075 мкг/см3* 
Эти стандартные растворы стабильны в течение одной недели при хранении в темноте* 
6 Оборудование 
Используют обычное лабораторное оборудование, в частности: 
6.1 рН-метр 
6.2 Мембранный фильтр с малым мертвым объемом и размером пор 0.22 мкм. 
6.3 Механическое или электрическое устройство, пригодное для измельчения образца. 
В качестве такого устройства может быть использован высокоскоростной ротационный куттер или мясорубка с решеткой, диаметр отверстий которой не превышает 4 мм. 
6.4 Лабораторный гомогенизатор (например гомогенизатор типа Стомахер или Вортекс)'' 
6.5 Фильтровальная бумага обеззоленная быстрофильтрующая диаметром примерно 15 см. 
Примечание — Например, можно использовать Ватман 41Ч 
6.6 Экстракционные патроны вместимостью 20 см5 с диатомитовой землей, которая задерживает липофильные компоненты из водных растворов* 
Примечание — Можно использовать, например, картриджи Ех(гв(и1® производства фирмы Мегск. Дзрмштадт* Германия (№ 117Э7)11. 
6.7 Водяная баня или нагревательный блок, позволяющие поддерживать температуру (40 * 1) С и имеющие устройство для выпаривания потоком азота (5.2). или ротационный вакуумный испаритель* 
6.8 Центрифужные пробирки вместимостью 25 см3. 
6.9 Смеситель для пробирок типа Вортекс, обеспечивающий частоту вращения примерно 700 мин"1. 
6.10 Центрифуга, обеспечивающая радиальное ускорение примерно 1000 д. 
6.11 Микропипетки вместимостью 300 мм3. 
6.12 Жидкостной хроматограф, оборудованный: 
- насосом постоянного потока; * инжектором; 
- хроматографической колонкой внутренним диаметром 3 мм. длиной 20 см. заполненную обращенной фазой СЕ или С,,, с размером частиц 5 мкм, или другой колонкой с эквивалентными характеристиками; 
- детектором УФУВИД. обеспечивающим измерение при длине волны 285 им. если возможно — диоднО'матричный детектором (используется для подтверждения обнаружения хлорамфеникола); 
- самописцем с регулируемым диапазоном измерения или интегратором, 
7 Отбор образцов 
Отбор образцов не является частью метода, изложенного в настоящем стандарте. Рекомендуемый метод отбора образцов приведен в ИСО 3100*1. 
Очень важно, чтобы в лабораторию поступали представительные образцы, которые в процессе хранения и транспортирования не были испорчены или изменены. 
От представительного образца, поступившего в лабораторию, отбирают для анализа образец массой не менее 200 г. Образец хранят в условиях, исключающих его порчу и изменение состава. 
8 Подготовка образца 
Доводят температуру образца до комнатной температуры. Удаляют жировую ткань и несъедобные части образца. 
Измельчают образец с помощью устройства (6.3). При этом необходимо следить за тем, чтобы температура образца не превышала 25 9С. При использовании мясорубки образец пропускают через нее не менее двух раз. 
Приготовленный образец помещают в герметично закрываемую емкость. Закрывают и хранят так, чтобы не допустить порчи и изменения его состава. 
8 случае необходимости образец хранят при температуре ниже минус 18 еС Анализ образца проводят как можно быстрее, но не позднее 24 ч после измельчения. 
9 Проведение испытаний 
Примечание — Для контроля повторяемости результатов (см. 11.2) проводят два параллельных определения в соответствии с 9.1—9.6. 
9.1 Общая часть 
Параллельно с анализом раствора (или серии растворов), полученного из испытуемого образца, проводят анализ раствора, полученного из образца, заведомо не содержащего хлорамфеникоп (образец-бланк), и раствора, полученного из образца, в который добавлен хлорамфеникол в количестве 10 мкг/кг {образец-бланк с внесенным хлорамфениколом). 
9.2 Подготовка пробы 
В конической колбе вместимостью 100 см3 взвешивают 10 г (т) измельченного образца (8) с точностью 0,1 г. 
9.3 Получение экстракта 
Добавляют 40.0 см3 воды и энергично перемешивают в течение 3 мин с помощью лабораторного гомогенизатора (6.4). 
Общий объем образующейся водной фазы (Ц) равен 40,0 см* плюс объем воды, содержащейся в пробе (обычно в 10 г пробы содержится примерно 7,5 см3 воды). Гомогенат фильтруют через бумажный фильтр (5). 
9.4 Твердофазная экстракция 
Переносят 20,0 смэ фильтрата (У;) в экстракционный патрон (6.6). 
Через (15 ± 2) мин элюируют хлорамфеникол с помощью 70 см3 дихлормегана (5.3). Выпаривают органическую фазу до объема примерно 1 см3 на водяной бане (6.7) в слабом потоке азота (5.2) или с помощью ротационного вакуумного испарителя (6.7). 
С помощью примерно 10 см* дихлорметана (5.3) переносят остаток в центрифужную пробирку (6.8). 
Осторожно выпаривают досуха.
ГОСТ Р ИСО 13493—2005 
9.5 Жидко-жидкостная экстракция 
К остатку добавляют 400 мм3 воды и 2.0 см3 толуола (5.4) и перемешивают с умеренной интенсивностью в течение 1 мим на смесителе Вортекс (6.9) с частотой вращения примерно 700 мин V 
Центрифугируют а течение 5 мин на центрифуге (6.10) с радиальным ускорением 1000 д. 
Пипеткой отбирают как можно больше органической фазы и отбрасывают ее. 
Добавляют 1,5 см3 толуола и перемешивают с умеренной интенсивностью в течение 1 мин на смесителе Вортекс (6.9) с частотой вращения примерно 700 мин V 
Центрифугируют в течение 5 мин на центрифуге (6.10) с радиальным ускорением 1000 д. 
Пипеткой отбирают как можно больше органической фазы и отбрасывают ее. 
Микропипеткой (6.11) переносят 300 мм3 водной фазы в подходящий сосуд. 
9*6 Хроматографический анализ 
9.6.1 Условия хроматографирования 
Параметр Значение 
Длина полны 285 нм 
Диапазон шкалы детектора от 0,005 до 0,010 единиц оптической плотное* 
ти. что соответствует полной шкале самописца 
Шкала самописца 10 мВ 
Скорость бумаги самописца 1.0 см/мин 
Объемная скорость потока подвижной фазы (5.7) 0.6 см3/мин 
Объем анализируемого раствора, вводимый (инжектируемый) в хроматограф 100 мм3 
Примечание — Инжектируемый объем и объемная скорость потока зависят от размеров колонки. 
9.6.2 Хроматографирование 
После стабилизации системы жидкостного хроматографа (6.12) инжектируют растворы, полученные из образца-бланка и образца-бланка с внесенным хлорамфениколом, четыре стандартных раствора хлорамфеникола (5.9), раствор, приготовленный из испытуемого образца по 9.5, и снова стандартные растворы хлорамфеникола (5.9). 
На хроматограммах образцов проверяют наличие сигнала на участке, соответствующем времени удерживания хлорамфеникола. 
9.6.3 Измерение 
Измеряют высоты или площади хроматографических пиков хлорамфеникола для испытуемого раствора и стандартных растворов хлорамфеникола. 
Измеренные для стандартных растворов высоты или площади пиков должны линейно зависеть от содержания хлорамо>еникола в этих растворах. 
Примечание — С помощью диодно-м а грич ного детектора может быть подтверждено обнаружение хлорамфеникола при его содержании в образце более 10 мкг/кг. 
10 Обработка результатов измерений 
Содержание хлорамфеникола и/, мкг/кг. в испытуемом образце рассчитывают по формуле 
№ - 
ЬтV1 
где Л—высота или площадь пика в единицах длины или площади, измеренные для испытуемого раствора: 
ЛЛ — высота или площадь пика, измеренные для одного из стандартных растворов (5.9); р — содержание хлорамфеникола в стандартном растворе, мкг/см3: т — масса испытуемой пробы (9.2), г; 
ц — объем водной фазы, полученной после гомогенизации по 9.3. см3 (V, = 40 см3 + объем воды в пробе, взятой на испытание);
Ч2 — объем фильтрата (Уг = 20 см3), перенесенного по 9.4 & экстракционный патрон, см3; у3 — объем воды (\/| = 400 мм3), добавленной по 9.5 к сухому остатку. ммэ. Результат вычислений округляют до 0.1 мкг/кг. 
Результат испытаний непьзя корректировать на открываемость. Огкрываемость должна быть указана в протоколе испытаний (12). 
11 Требования к точности результатов измерений 
11.1 Межлабораторные испытания 
Точность метода была установлена с помощью межлабораторных испытаний, проведенных в соответствии с ИСО 5725-1 и ИСО 5725-2. 
Результаты этой межлабораторной проверки опубликованы в [1]. Результаты этой проверки не могут быть распространены на области концентраций и на матрицы, отличные от указанных в настоящем стандарте. 
Результаты другой межлабораторной проверки, приведенной в соответствии с ИСО 5725-1 и ИСО 5725-2. показывают, что открываемоегь для мяса, мяса птицы и мясных продуктов воспроизводима и равна примерно 55 %. 
11.2 Повторяемость 
Абсолютное значение разности результатов двух независимых единичных испытаний, выполненных за короткий промежуток времени одним методом для одного измельченного образца в одной лаборатории одним оператором на одном и том же оборудовании, может превышать 2,1 мкг/кг не более чем в 5 % случаев при содержании хлорамфеникола в образце 10 мкг/кг. 
11.3 Воспроизводимость 
Абсолютное значение разности результатов двух независимых единичных испытаний, выполненных одним методом для одентичного измельченного образца в разных лабораториях разными операторами с использованием разного оборудования, может превышать 4.9 мкг/кг не более чем в 5 % случаев при содержании хлорамфеникола 10 мкг/кг. 
12 Протокол испытания 
В протоколе испытания необходимо указать: 
- информацию, необходимую для полной идентификации образца; 
- использованный метод отбора образцов (если известен); 
- использованный метод испытаний с указанием ссылки на настоящий стандарт; 
- условия проведения испытаний, не отраженные в настоящем стандарте или считающиеся неоднозначными, а также все имевшие место случаи, которые могут повлиять на результаты испытаний; 
- полученный результат испытаний или два результата испытаний, если проводилась проверка повторяемости; 
- открываемость.