ГОСТ 23231-90: Колбасы и продукты мясные вареные. Метод определения остаточной активности кислой фосфатазы

Дата введения 01.07.91 
Настоящий стандарт распространяется на вареные колбасы, сосиски, сардельки и вареные продукты из свинины и устанавливает метод определения остаточной активности кислой фосфата зы. 
Метод основан на фотометрическом определении в продукте интенсивности развивающейся окраски, зависящей от остаточной активности кислой фосфат азы, выраженной массовой долей фенола. 
Метод применяют в случае сомнения в проваренности продукта. 

I. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ 
1.1. Отбор проб - по ГОСТ 9792. 
1.2. Точечные пробы продуктов из свинины должны быть освобождены от жировой ткани и шкурки, а точечные пробы вареных колбас, сосисок и сарделек — от оболочки и шпика. 
1.3. Для составления объединенной пробы точечные пробы соединяют, дважды измельчают на бытовой или электрической мясорубке и тщательно перемешивают. 
Объединенную пробу помещают в стеклянную или пластмассовую банку вместимостью 200-400 см3, заполнив ее полностью, и закрывают крышкой. 
1.4. Объединенную пробу, подготовленную для испытания, хранят при температуре (4 1 2) 'С до окончания испытаний. 
2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ 
Мясорубка бытовая по ГОСТ 4025 или электромясорубка бытовая по ГОСТ 20469 с отверстиями решетки диаметром от 3 до 4 мм. 
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104* 2-го класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г. 
Потенциометре погрешностью измерения ±0.06рН. 
Калориметр фотоэлектрический лабораторный с устройством для отечнтывания значения оптической плотности и светофильтром с /тал = (600 л 10) им или спектрофотометр для измерения в видимой области спектра. 
Ультратермостат или водяная баня, обеспечивающие регулирование температуры от 30 до 99 'С. 
Воронки В-36-80 ХС, В-56—80 ХС по ГОСТ 25336. 
Колбы мерные 2-500-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770. вымеренные на наливной объем. 
Пипетки 4-2-1, 4-2-2. 7-2-5. 7-2-10 по ГОСТ 29169. 
Холодильник ХШ-1-400-29/32 ХС по ГОСТ 25336. 
Колба К-1-2000-29/32 ТХС по ГОСТ 25336. 
Пробирки 111-16-150 ХС, П1-21-200 ХС, 111-25-200 ХС по ГОСТ 25336. 
Палочки стеклянные. 
Бумага фильтроватьная лабораторная по ГОСТ 12026. 
Груша резиновая. 
Кислота лимонная по ГОСТ 3652, х. ч. 
Натрий лимоннокислый 5-водный по ГОСТ 22280, ч. д. а. 
Феннлфосфорной кислоты динатриевая соль по ТУ 6-09-3752, свежеприготовленный раствор 2 г/дм3. 
Кислота трихлоруксусная кристаллическая по ТУ 6-09-1926. растворы 50 и 200 г/дх дистиллированной воды, вносят 25 г кристаллической трихлоруксусной кислоты. После растворения содержимое колбы доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. Полученный раствор содержит 20 мкг фенола в I см3. 
3.4. Построение г р а л у и р о в о ч н о г о графика 
В пробирки вносят следующие объемы стандартного раствора: 0: 0.25; 0.5: 1.0: 1.5; 2.0 см3, что соответствует массе фенола: 0; 5; 10: 20; 30; 40 мкг. Доводят объем в каждой пробирке до 2.5 см3, добавляя соответствующий объем 50 г/дм3 раствора трихлоруксусной кислоты (2,5; 2.25; 2.0: 1,5; 1.0; 0.5 см3) и перемешивая. В каждую пробирку добавляют 5 см3 0.5 моль/дм3 раствора гидроокиси натрия, перемешивают, выдерживают 10 мин и добавляют 1,5 см3 реактива Фолина. разведенного дистиллированной водой в соотношении 1:2 и перемешивают. 
Через 30 мин измеряют оптическую плотность растворов по отношению к 50 г/см3 раствору трихлоруксусной кислоты на фотоэлектрическом калориметре с применением светофильтра с X тлх = = (600 ± 10) нм в кювете с расстоянием между рабочими гранями 10 мм или на спектрофотометре при длине волны 600 им в кювете аначогичного размера.
Но полученным средним данным по трем стандартным растворам на миллиметровой бумаге размером 20 х 20 см строят градуировочный график. На оси абсцисс откладывают значение массовой доли фенола (микрограмм в 9 см3 окрашенного раствора); на оси ординат значение соответствующей оптической плотности (О). Градуировочный график должен проходить через качало координат. Пример градуировочного графика приведен в приложении. 
4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ 
4.1. От объединенной пробы, подготовленной к испытанию, берут две навески массой по I г (результат взвешивания записывают до третьего десятичного знака) и переносят в две пробирки (одна — контрольная, другая — опытная). 
В пробирки вносят по 10 см3 иитратиого буфера рН 6,5. тщательно перемешивают стеклянной палочкой и настаивают в течение 20 мин при комнатной температуре, периодически перемешивая. 
В контрольную пробирку добавляют 5 см3 200 г/дм3 раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и добавляют 5 см3 2 г/дм3 раствора динатриевой соли фенилфосфорной кислоты, выдерживают 10 мин и фильтруют. 
В опытную пробирку добавляют 5 см3 2 г/дм3 раствора динатриевой соли фенилфосфорной кислоты и помешают в ультратермостат при температуре (39 ± I) "С на 1 ч. затем добавляют 5 см3 200 г/дм3 раствора трихлоруксусной кислоты, выдерживают 10 мин и фильтруют. 
Для проведения цветной реакции из контрольной и опытной пробирок отбирают по 2.5 см3 безбелкового фильтрата. Цветную реакцию проводят по п. 3.4. 
Массовую долю фенола определяют по градуировочному графику. 
5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ 
5.1. Массовую долю фенола Л'. %. вычисляют по формуле 
^ _ (ж, - /и2) • 20 -100 т- 2.5 ■ 10ь ' 
где /и, — масса фенола в опытной пробирке, найденная по градуировочному графику, мкг; 
т2 — масса фенола в контрольной пробирке, найденная по градуировочному графику, мкг: 
т — масса анализируемой пробы, г; 
106 — коэффициент пересчета в граммы: 
20 — разведение, см3; 
2,5 объем фильтрата, отобранный для цветной реакции, см3. 
Вычисление проводят до четвертого десятичного знака. 
5.2. За окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое результатов двух параллельных определений, допускаемое расхождение между которыми при Р= 0,95 не должно превышать 10 % по отношению к среднеарифметическому. 
Окончательный результат определяют до третьего десятичного знака. 
5.3. Допускаемое расхождение между результатам»! испытаний, проведенных в двух разных лабораториях, при /' = 0.95 не должно превышать 25 % по отношению к среднеарифметическому значению. 
5.4. Значение среднего квадратического отклонения случайной составляющей погрешности измерений массовой доли фенола одной и той же пробы в разных лабораториях при допускаемых методикой изменениях влияющих факторов составляет 0,0002 .V.


0