Дата введения 1994-01-01
1 Назначение и область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод определения массовой доли L (—)-оксипролнна в мясе и мясных продуктах.
2 Ссылка
ГОСТ Р 51447—99 (ИСО 3100-1—91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб
3 Определение
Массовая доля L (—)-окснпролина в мясе и мясных продуктах массовая доля L (—)-окси-нролина, определенная в соответствии с методикой, установленной настояшим стандартом, выраженная в процентах к массе продукта.
4 Сущность метода
Гидролиз навески в постоянно кипящем растворе соляной кислоты, содержащем хлорид олова (II). Фильтрация и разбавление гидратизата. Нейтрализация гндроксидом натрия алнквотной части разбавленного гидролнзата. Фильтрация и разбаазение. Окисление L (—)-оксипролина хлорамипом-Т с последующим образованием окрашенного в красный нвет соединения />-диметиламинобепзальде-гида. Фотометрическое измерение при длине волны 558 им.
5 Реактивы
Все реактивы должны быть аналитического качества. Используемая вола должна быть дистиллированной или эквивалентной чистоты.
5.1 Раствор соляной кислоты, содержащий хлорид олова (II)
Растворяют в воде 7,5 г хлорида олова (II) дигилрата (SnCl. 2Н.О). разбавляют до 500 см3 и добавляют 500 см* соляной кислоты (р>„ 1.19 г/см').
5.2 Соляная кислота, приблизительно 6 моль/дм3 расi нор
Смешивают равные объемы соляной кислоты (рд, 1.19 г/см;) и воды.
5.3 Гидроксид натрия, приблизительно 10 моль/дм-' раствор
Растворяют в воде 40 г гидроксида натрия, охлаждают и разбавляют ло 100 см3.
Издание официальное
Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта России
5.4 Гилроксид натрия, приблизительно I моль/дм-' рас шор
Растворяют в иоде 1 г гидрокснда натрия, охлаждают и разбавляют до 100 см3.
5.5 Буферный раствор, рН 6,0
Растворяют в иоде:
50 г лимонной кислоты монопирата (Cr,HsO. H,О);
26,3 г гидрокснда натрия;
146.1 г ацетата натрия тригидрата |Na(CH-CO,) ЗН,0|.
Разбавляют водой до 1000 см3. Смешивают этот раствор с 200 см3 воды и 300 см3 пропанола-1.
Этот раствор устойчив в течение нескольких недель при 4 "С.
5.6 Реактив хлорамина-!'
Растворяют в 10 см3 воды 1.41 г Л'- хлор - р- тол уол сул ьфам ид а натрия тригидрата (хлорамнн-Т) и последовательно добавляют 10 см3 пропанола-1 и 80 см' буферного раствора.
Этот раствор готовят непосредственно перед использованием.
5.7 Цветной реакгнв
10,0 г /ьднметиламипобензальдегнда растворяют в 35 см3 60 %-ного раствора хлорной кислоты (т/т), а затем медленно добавляют 65 см3 пропанола-2.
Этот раствор готовят в день использования.
Примечание— Если необходима очистка /»-диметиламинобен альдегида (см. примечание к п. SJS). поступают следующим образом: готовят насыщенный раствор р-ли метилам и нобе н зат ьде гида и горячем 70 %-ном этаноле (У/V). Охлаждают сначала при комнатной температуре, а затем в холодильнике. Примерно через 12 ч раствор фильтруют на воронке Бюхнера. Промывают небольшим количеством 70 Яз-ного этанола (У/У). Снова растворяют в горячем 70 %-ном этаноле < У/У). Добавляют холодную воду и тщательно перемешивают. Повторяют эту процедуру до тех пор. пока не образуется достаточное количество молочно-белых кристаллов. Оставляют на ночь в холодильнике. Фильтруют раствор на воронке Бюхнера. промывают 50 %-ным этанолом (У/У) и высушивают под вакуумом в присутствии оксида фосфора (У).
5.8 Стандаршые растворы L (—)-оксииролнна
Готовят основной раствор, растворяя в воде 50 мг 4-оксипирролидим-а-карбоновой кислоты (оксипролин). Добавляют одну каплю раствора соляной кислоты и разбавляют водой до 100 см3. Этот раствор устойчив в течение 1 мес при 4 "С.
В день использования 5 см3 основного раствора разбавляют до 500 см-1 водой в мерной колбе. Затем готовят четыре стандартных раствора, разбавляя водой 10, 20, 30 и 40 см3 этого раствора до 100 см! и получая соответственно концентрации L (- )-оксипролина 0.5: 1; 1.5 и 2 мкг/см3.
6 Аппаратура
Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1—6.10.
6.1 Механическая мясорубка лабораторного типа с решеткой, диаметр отверстий которой не более 4 мм.
6.2 Колба для гидролиза круглодонная или плоскодонная, вместимостью около 200 см3, с широким тортом, оснащенная воздушным или водяным холодильником.
6.3 Электрическое устройство для нагревания (например, калильная сетка для нагревания, электроплитка или электрическая песчаная баня).
6.4 Фильтры из фильтровальной бумаги диаметром 12,5 см.
6.5 рН-метр.
6.6 Алюминиевая или пластиковая фольга.
6.7 Водяная баня с терморегулированием температуры в пределах (60±5) "С.
6.8 Спектрофотометр, обеспечивающий измерение при длине волны (558±2) им, или фотоэ-лектроколориметр со светофильтром, имеюшим максимум поглощения при длине волны (558±2) им.
6.9 Кюветы с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм.
6.10 Аналитические весы.
7 Отбор проб
7.1 Отбирают пробу продукта не менее 200 г.
7.2 Пробу хранят в таких условиях, чтобы предотвратить порчу и изменение состава.
8 Проведение анализа
К. I Подготовка проб к испытанию
8.1.1 Сырые мясо и мясные продукты
Мясо в охлажденном состоянии (чуть ниже 0 'С) острым ножом нарезают на кубики (приблизительно 0.5 см\ т. е. длина стороны кубика примерно Н мм).
Пробу помешают в сосуд и герметично закрывают или упаковывают под вакуумом в термостойкую пластиковую пленку: затем нагревают и выдерживают при температуре 70 "С в течение 30 мин; охлаждают и продолжают испытание в соответствии с требованиями п. 8.1.2.
В процессе последующих стадий подготовки пробы и взвешивания навески необходимо обеспечить хорошее перемешивание пробы, особенно равномерное распределение жира и жидкости.
Примечание — Тепловая обработка размягчает соединительную ткань и делает ее менее устойчивой к гомогенизации. Однако это может также привести к отделению жидкости, содержащей желатин. Присутствие жира может также потребовать особою внимания к приготовлению гомогенной пробы дли испытания.
8.1.2 Мясо и мясные продукты, готовые к употреблению
Пробу гомогенизируют, пропуская ее дважды через мясорубку и тщательно перемешивая. Хранят гомогенизированную пробу в целиком заполненном воздухонепроницаемом закрытом сосуде в таких условиях, чтобы предотвратить ее порчу и изменение состава. Анализ испытуемой пробы проводят в течение 24 ч.
8.2 Навеска
В колбу для гидролиза взвешивают окаю 4 г испытуемой пробы с точностью 0,001 г. Навеску берут так, чтобы ни одна частица пробы не прилипла к боковой стенке колбы.
8.3 Гидролиз
8.3.1 В колбу помешают несколько кусочков карбида кремния для равномерного кипения, добавляют (100±1) см3 раствора соляной кислоты, содержащей хлористое олово (II). Колбу соединяют с воздушным или водяным холодильником, нагревают до спокойного кипения на нагревательном устройстве и выдерживают в течение 16 ч (лучше оставить на ночь).
Примечание — По желанию аналитика гидролиз можно проводить последовательно в две стадии, каждая от 7 до S ч в течение двух дней. Результаты данного альтернативного метода незначительно отличаются от результатов, полученных при проведении гидролиза в одну стадию в течение 16 ч.
8.3.2 Горячий гидролнзат фильтруют через фильтровальную бумагу в мерную колбу с одной отметкой вместимостью 200 cmj. Колбу и фильтровальную бумагу промывают три раза, используя каждый раз по 10 см* горячего раствора соляной кислоты, промывную воду добавляют к гидролизату. Объем доводят водой до метки и перемешивают. Определение проводят не позднее следующего дня после гидрашза.
8.4 Проведение цветной реакции и измерение оптической плотности
8.4.1 В химический стакан пипеткой переносят такой объем гидролизата. чтобы после его разбавления до 250 См3 (см. п. 8.4.2) концентрация L (—)-оксипролина была от 0.5 до 2 мкг/см3.
П р и м с ч а н и с — В большинстве случаев обьем гидролизата от 5 до 25 см' в зависимости от количества соединительной ткани, содержащейся в пробе.
8.4.2 С помощью pH-метра доводят pH до (8±(),2), добавляя по каплям сначала К) моль/дм1 раствор гилроксида натрия, а затем I мать/дм' раствор гидрокенда натрия. Содержимое стакана фильтруют в мерную колбу с одной отметкой вместимостью 250 см'. Промывают стакан и осадок гидрокенда олова на фильтровальной бумаге не менее трех раз водой порциями по 30 см', собирая промывную жидкость в мерную колбу. Объем доводят до метки и перемешивают.
8.4.3 4,00 см3 этого раствора переносят в пробирку и добавляют 2,00 см3 реактива хлорамина-Т. перемешивают и оставляют при комнатной температуре на (20±1) мин.
8.4.4 Добавляют 2,00 см3 цветного реактива, тщательно перемешивают и закрывают пробирку алюминиевой или пластиковой фольгой.
8.4.5 Пробирку быстро переносят в водяную баню температурой (60±5) "С и нагревают в течение точно 20 мин.
8.4.6 Охлаждают под струей воды в течение не менее 3 мин.
8.4.7 Оптическую плотность измеряют при длине волны (558±2) им в кювете на спектрофотометре или фотоэлектроколориметре со светофильтром.
8.4.8 Вычитают оптическую плотность контрольного раствора и находят концентрацию
I(— )-оксипролина в разбавленном гидролнзате по калибровочному графику, построенному, как описано в 8.6.
8.5 Контрольное испытание
Процедуру, описанную в 8.4.3—8.4.8, используя вместо разбавленного гид релиза та воду, проводят в двух повторностях.
Примечание — Если оптическая плотность контрольного раствора превышает 0.040. следует приготовить свежий цветной реактив и. при необходимости, провести очистку /»-диметиламинобентальдегида.
8.6 Калибровочный график
8.6.1 Повторяют всю процедуру определения, описанную в 8.4.3—8.4.8, используя вместо разбавленного гидролизата по очереди 4.00 см1 каждого из четырех разбавленных стандартных растворов /. (—)-оксипролина.
8.6.2 Строят чертеж, нанося измеренные значения оптической плотности против соответствующих концентраций стандартных растворов Ц— )-оксипролнна и проводя прямую линию через нанесенные на чертеж точки и начало координат.
11 р и м с ч а н и с — Для каждой серии анали зов необходимо строить калибровочный график.
8.7 Повторносгь результатов
Повторность проведения анализа дву хкратная.
9 Выражение результатов
9.1 Метод расчета и формула
Для каждой из двух навесок массовую долю I. (—)-оксипролина (X) в процентах к массе продукта вычисляют по формуле
где с концентрация (-)-оксипролина в разбавленном гидролнзате, найденная по калибровочному графику, мкг/см'; /п масса навески, г;
V объем гидролизата, используемый для разбавления ло 250 см3, см'.
'За окончательный результат анализа принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений при условии, что это удовлетворяет требованиям 9.2. Результат вычисляют с точностью до 0,01 %.
9.2 Согласование между повторными результатами испытаний
Расхождение между результатами двух параллельных определений, проведенных одним и тем же аналитиком, не должно превышать 5 % по отношению к среднему арифметическому значению.
10 Отчет об испытании
В отчете об испытании должны быть указаны используемый метод и полученные результаты. В нем также должны быть упомянуты любые условия проведения испытаний, не установленные данным стандартом или касающиеся как необязательных, так и любых других подробностей, которые могут повлиять на конечный результат.
Отчет должен включать в себя все подробные данные, необходимые для полной идентификации пробы.
1 Назначение и область применения
Настоящий стандарт устанавливает метод определения массовой доли L (—)-оксипролнна в мясе и мясных продуктах.
2 Ссылка
ГОСТ Р 51447—99 (ИСО 3100-1—91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб
3 Определение
Массовая доля L (—)-окснпролина в мясе и мясных продуктах массовая доля L (—)-окси-нролина, определенная в соответствии с методикой, установленной настояшим стандартом, выраженная в процентах к массе продукта.
4 Сущность метода
Гидролиз навески в постоянно кипящем растворе соляной кислоты, содержащем хлорид олова (II). Фильтрация и разбавление гидратизата. Нейтрализация гндроксидом натрия алнквотной части разбавленного гидролнзата. Фильтрация и разбаазение. Окисление L (—)-оксипролина хлорамипом-Т с последующим образованием окрашенного в красный нвет соединения />-диметиламинобепзальде-гида. Фотометрическое измерение при длине волны 558 им.
5 Реактивы
Все реактивы должны быть аналитического качества. Используемая вола должна быть дистиллированной или эквивалентной чистоты.
5.1 Раствор соляной кислоты, содержащий хлорид олова (II)
Растворяют в воде 7,5 г хлорида олова (II) дигилрата (SnCl. 2Н.О). разбавляют до 500 см3 и добавляют 500 см* соляной кислоты (р>„ 1.19 г/см').
5.2 Соляная кислота, приблизительно 6 моль/дм3 расi нор
Смешивают равные объемы соляной кислоты (рд, 1.19 г/см;) и воды.
5.3 Гидроксид натрия, приблизительно 10 моль/дм-' раствор
Растворяют в воде 40 г гидроксида натрия, охлаждают и разбавляют ло 100 см3.
Издание официальное
Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта России
5.4 Гилроксид натрия, приблизительно I моль/дм-' рас шор
Растворяют в иоде 1 г гидрокснда натрия, охлаждают и разбавляют до 100 см3.
5.5 Буферный раствор, рН 6,0
Растворяют в иоде:
50 г лимонной кислоты монопирата (Cr,HsO. H,О);
26,3 г гидрокснда натрия;
146.1 г ацетата натрия тригидрата |Na(CH-CO,) ЗН,0|.
Разбавляют водой до 1000 см3. Смешивают этот раствор с 200 см3 воды и 300 см3 пропанола-1.
Этот раствор устойчив в течение нескольких недель при 4 "С.
5.6 Реактив хлорамина-!'
Растворяют в 10 см3 воды 1.41 г Л'- хлор - р- тол уол сул ьфам ид а натрия тригидрата (хлорамнн-Т) и последовательно добавляют 10 см3 пропанола-1 и 80 см' буферного раствора.
Этот раствор готовят непосредственно перед использованием.
5.7 Цветной реакгнв
10,0 г /ьднметиламипобензальдегнда растворяют в 35 см3 60 %-ного раствора хлорной кислоты (т/т), а затем медленно добавляют 65 см3 пропанола-2.
Этот раствор готовят в день использования.
Примечание— Если необходима очистка /»-диметиламинобен альдегида (см. примечание к п. SJS). поступают следующим образом: готовят насыщенный раствор р-ли метилам и нобе н зат ьде гида и горячем 70 %-ном этаноле (У/V). Охлаждают сначала при комнатной температуре, а затем в холодильнике. Примерно через 12 ч раствор фильтруют на воронке Бюхнера. Промывают небольшим количеством 70 Яз-ного этанола (У/У). Снова растворяют в горячем 70 %-ном этаноле < У/У). Добавляют холодную воду и тщательно перемешивают. Повторяют эту процедуру до тех пор. пока не образуется достаточное количество молочно-белых кристаллов. Оставляют на ночь в холодильнике. Фильтруют раствор на воронке Бюхнера. промывают 50 %-ным этанолом (У/У) и высушивают под вакуумом в присутствии оксида фосфора (У).
5.8 Стандаршые растворы L (—)-оксииролнна
Готовят основной раствор, растворяя в воде 50 мг 4-оксипирролидим-а-карбоновой кислоты (оксипролин). Добавляют одну каплю раствора соляной кислоты и разбавляют водой до 100 см3. Этот раствор устойчив в течение 1 мес при 4 "С.
В день использования 5 см3 основного раствора разбавляют до 500 см-1 водой в мерной колбе. Затем готовят четыре стандартных раствора, разбавляя водой 10, 20, 30 и 40 см3 этого раствора до 100 см! и получая соответственно концентрации L (- )-оксипролина 0.5: 1; 1.5 и 2 мкг/см3.
6 Аппаратура
Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1—6.10.
6.1 Механическая мясорубка лабораторного типа с решеткой, диаметр отверстий которой не более 4 мм.
6.2 Колба для гидролиза круглодонная или плоскодонная, вместимостью около 200 см3, с широким тортом, оснащенная воздушным или водяным холодильником.
6.3 Электрическое устройство для нагревания (например, калильная сетка для нагревания, электроплитка или электрическая песчаная баня).
6.4 Фильтры из фильтровальной бумаги диаметром 12,5 см.
6.5 рН-метр.
6.6 Алюминиевая или пластиковая фольга.
6.7 Водяная баня с терморегулированием температуры в пределах (60±5) "С.
6.8 Спектрофотометр, обеспечивающий измерение при длине волны (558±2) им, или фотоэ-лектроколориметр со светофильтром, имеюшим максимум поглощения при длине волны (558±2) им.
6.9 Кюветы с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм.
6.10 Аналитические весы.
7 Отбор проб
7.1 Отбирают пробу продукта не менее 200 г.
7.2 Пробу хранят в таких условиях, чтобы предотвратить порчу и изменение состава.
8 Проведение анализа
К. I Подготовка проб к испытанию
8.1.1 Сырые мясо и мясные продукты
Мясо в охлажденном состоянии (чуть ниже 0 'С) острым ножом нарезают на кубики (приблизительно 0.5 см\ т. е. длина стороны кубика примерно Н мм).
Пробу помешают в сосуд и герметично закрывают или упаковывают под вакуумом в термостойкую пластиковую пленку: затем нагревают и выдерживают при температуре 70 "С в течение 30 мин; охлаждают и продолжают испытание в соответствии с требованиями п. 8.1.2.
В процессе последующих стадий подготовки пробы и взвешивания навески необходимо обеспечить хорошее перемешивание пробы, особенно равномерное распределение жира и жидкости.
Примечание — Тепловая обработка размягчает соединительную ткань и делает ее менее устойчивой к гомогенизации. Однако это может также привести к отделению жидкости, содержащей желатин. Присутствие жира может также потребовать особою внимания к приготовлению гомогенной пробы дли испытания.
8.1.2 Мясо и мясные продукты, готовые к употреблению
Пробу гомогенизируют, пропуская ее дважды через мясорубку и тщательно перемешивая. Хранят гомогенизированную пробу в целиком заполненном воздухонепроницаемом закрытом сосуде в таких условиях, чтобы предотвратить ее порчу и изменение состава. Анализ испытуемой пробы проводят в течение 24 ч.
8.2 Навеска
В колбу для гидролиза взвешивают окаю 4 г испытуемой пробы с точностью 0,001 г. Навеску берут так, чтобы ни одна частица пробы не прилипла к боковой стенке колбы.
8.3 Гидролиз
8.3.1 В колбу помешают несколько кусочков карбида кремния для равномерного кипения, добавляют (100±1) см3 раствора соляной кислоты, содержащей хлористое олово (II). Колбу соединяют с воздушным или водяным холодильником, нагревают до спокойного кипения на нагревательном устройстве и выдерживают в течение 16 ч (лучше оставить на ночь).
Примечание — По желанию аналитика гидролиз можно проводить последовательно в две стадии, каждая от 7 до S ч в течение двух дней. Результаты данного альтернативного метода незначительно отличаются от результатов, полученных при проведении гидролиза в одну стадию в течение 16 ч.
8.3.2 Горячий гидролнзат фильтруют через фильтровальную бумагу в мерную колбу с одной отметкой вместимостью 200 cmj. Колбу и фильтровальную бумагу промывают три раза, используя каждый раз по 10 см* горячего раствора соляной кислоты, промывную воду добавляют к гидролизату. Объем доводят водой до метки и перемешивают. Определение проводят не позднее следующего дня после гидрашза.
8.4 Проведение цветной реакции и измерение оптической плотности
8.4.1 В химический стакан пипеткой переносят такой объем гидролизата. чтобы после его разбавления до 250 См3 (см. п. 8.4.2) концентрация L (—)-оксипролина была от 0.5 до 2 мкг/см3.
П р и м с ч а н и с — В большинстве случаев обьем гидролизата от 5 до 25 см' в зависимости от количества соединительной ткани, содержащейся в пробе.
8.4.2 С помощью pH-метра доводят pH до (8±(),2), добавляя по каплям сначала К) моль/дм1 раствор гилроксида натрия, а затем I мать/дм' раствор гидрокенда натрия. Содержимое стакана фильтруют в мерную колбу с одной отметкой вместимостью 250 см'. Промывают стакан и осадок гидрокенда олова на фильтровальной бумаге не менее трех раз водой порциями по 30 см', собирая промывную жидкость в мерную колбу. Объем доводят до метки и перемешивают.
8.4.3 4,00 см3 этого раствора переносят в пробирку и добавляют 2,00 см3 реактива хлорамина-Т. перемешивают и оставляют при комнатной температуре на (20±1) мин.
8.4.4 Добавляют 2,00 см3 цветного реактива, тщательно перемешивают и закрывают пробирку алюминиевой или пластиковой фольгой.
8.4.5 Пробирку быстро переносят в водяную баню температурой (60±5) "С и нагревают в течение точно 20 мин.
8.4.6 Охлаждают под струей воды в течение не менее 3 мин.
8.4.7 Оптическую плотность измеряют при длине волны (558±2) им в кювете на спектрофотометре или фотоэлектроколориметре со светофильтром.
8.4.8 Вычитают оптическую плотность контрольного раствора и находят концентрацию
I(— )-оксипролина в разбавленном гидролнзате по калибровочному графику, построенному, как описано в 8.6.
8.5 Контрольное испытание
Процедуру, описанную в 8.4.3—8.4.8, используя вместо разбавленного гид релиза та воду, проводят в двух повторностях.
Примечание — Если оптическая плотность контрольного раствора превышает 0.040. следует приготовить свежий цветной реактив и. при необходимости, провести очистку /»-диметиламинобентальдегида.
8.6 Калибровочный график
8.6.1 Повторяют всю процедуру определения, описанную в 8.4.3—8.4.8, используя вместо разбавленного гидролизата по очереди 4.00 см1 каждого из четырех разбавленных стандартных растворов /. (—)-оксипролина.
8.6.2 Строят чертеж, нанося измеренные значения оптической плотности против соответствующих концентраций стандартных растворов Ц— )-оксипролнна и проводя прямую линию через нанесенные на чертеж точки и начало координат.
11 р и м с ч а н и с — Для каждой серии анали зов необходимо строить калибровочный график.
8.7 Повторносгь результатов
Повторность проведения анализа дву хкратная.
9 Выражение результатов
9.1 Метод расчета и формула
Для каждой из двух навесок массовую долю I. (—)-оксипролина (X) в процентах к массе продукта вычисляют по формуле
где с концентрация (-)-оксипролина в разбавленном гидролнзате, найденная по калибровочному графику, мкг/см'; /п масса навески, г;
V объем гидролизата, используемый для разбавления ло 250 см3, см'.
'За окончательный результат анализа принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений при условии, что это удовлетворяет требованиям 9.2. Результат вычисляют с точностью до 0,01 %.
9.2 Согласование между повторными результатами испытаний
Расхождение между результатами двух параллельных определений, проведенных одним и тем же аналитиком, не должно превышать 5 % по отношению к среднему арифметическому значению.
10 Отчет об испытании
В отчете об испытании должны быть указаны используемый метод и полученные результаты. В нем также должны быть упомянуты любые условия проведения испытаний, не установленные данным стандартом или касающиеся как необязательных, так и любых других подробностей, которые могут повлиять на конечный результат.
Отчет должен включать в себя все подробные данные, необходимые для полной идентификации пробы.
Комментарии