***

наш журнал - это подспорье работникам предприятий пищевой промышленности, производителям и поставщикам оборудования, сырья и ингредиентов

пятница, 5 апреля 2013 г.

ГОСТ Р 50454-92: Мясо и мясные продукты. Обнаружение и учет предполагаемых колиформных бактерий и Еsсhеriсhiа соli (арбитражный метод)

Дата введения 1994-01-01 
1 Назначение и область применения 
Настоящий стандарт устанавливает метод обнаружения и учета предполагаемых колнформных бактерий и Escherichia coli (Е. coli) о мясе и мясных продуктах. 
2 Ссылка 
ГОСТ Р 50455—92 (ИСО 3565—75) Мясо и мясные продукты. Обнаружение сачьмопелл (арбитражный метод) 
ГОСТ Р 51447—99 (ИСО 3100-1—91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб 

3 Определения 
3.1 Предполагаемые колнформные бактерии микроорганизмы, ферментирующие лактозу с образованием газа при 30 "С. обнаруженные при проведении анализа в соответствии с указанным методом. 
3.2 Предполагаемые Escherichia coli — предполагаемые колнформные бактерии, ферментирующие лактозу с образованием газа при 44 С и продуцирующие индол из триптофана при 44 "С, обнаруженные при проведении анализа в соответствии с указанным методом. 
3.3 Подсчет предполагаемых колнформных бактерий и Escherichia coli, обнаруженных в 1 г мяса или мясных продуктов при проведении анализа в соответствии с указанным методом. 
4 Сущность метода 
Измельчение испытуемой пробы с последующей гомогенизацией навески в стерильном разбавителе. Приготовление из гомогената десятикратных разведений, из которых делают посев в ряд пробирок с жидкой селективной средой. По количеству пробирок, показывающих образование газа после выдерживания в термостате при температуре 30 "С. определяют наиболее вероятное число предполагаемых колнформных бактерий в 1 г продукта, используя таблицу НВЧ (см. приложение). 
Для учета предполагаемых Е. coli делают посев из положительных пробирок (т. е. пробирок, показывающих образование газа) в пробирки с жидкой селективной средой и в пробирки с трипто-иовой водой и выдерживают в термостате при температуре 44 "С. По количеству пробирок, показывающих образование газа в селективной среде и образование индола в триптоновой воде, определяют наиболее вероятное число предполагаемых Е. coli, используя таблицу НВЧ (см. приложение). 
Иманис офииналыкк.- 
Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Госстандарта России 
5 Питательные среды, жидкость для разбавления и реактивы 
5.1 Основные материалы 
Для получения сопоставительных результатов рекомендуется использовать безводные компоненты питательных сред одинакового качества, химические реактивы аналитического качества или сухие готовые среды. Используемая вода должна быть дистиллированной или, по крайней мере, эквивалентной чистоты. 
5.2 Питательные среды 
5.2.1 Лактозный бульон с желчью и бриллиантовым зеленым (селективная среда) 
Состав: 
а — срсла двойной б — срсла одинарной 
концентрации концентрации 
пептон 20.0 г 10.0 г 
лактоза 20.0 г 10.0 г 
бычья желчь (сухая) 40.0 г 20.0 г 
бриллиантовый зеленый по ГОСТ Р 50455 0.0266 I 0.0133 г 
вода 1000 см5 1000 смЗ 
Примечание — Ввиду того, что готовая срсла может не всегда лавать ожидаемый результат, се качество должно быть проверено перед употреблением. 
Приготовление. Компоненты или сухую готовую среду растворяют в кипящей воде. Устанавливают рН среды раствором гидрокенда натрия или раствором соляной кислоты подходящей концентрации так. чтобы после стерилизации его значение соста&1яло (7.2±0.1) при 25 "С. Среду по 10 см- переносят в бактериологические пробирки (16 х 160 мм — для среды одинарной концентрации или 20 х 200 мм - для среды двойной концентрации), в которые помещают трубки Дархема, или во флаконы с завинчивающимися пробками подобной вместимости. Стерилизуют среду при температуре (121±!) "С в течение 15 мин. Над жидкостью должно быть видно не менее 1 см трубки Дархема. При наличии пузырьков их удаляют, наклоняя и постукивая пробирки. Пробирки, содержащие газовые пузырьки, не используют. 
5.2.2 Триптоновая вода 
Состав: 
триптон..................................... 10.0 г; 
хлорид натрия...........,.................... 5,0 г; 
вода........................................ 1000 см3. 
Приготовление. Компоненты или сухую готовую среду растворяют в горячей воде. Устанавливают рН среды раствором гидрокенда натрия или раствором соляной кислоты подходящей концентрации так. чтобы после стерилизации его значение составляло (7,3±0,1) при 25 "С. Среду по 5~ 10 см5 переносят в бактериологические пробирки или флаконы с завинчивающимися пробками аналогичной вместимости и стерилизуют при температуре (121±!) "С в течение 15 мин. 
5.3 Жидкость для разбавления 
Состав: 
пептон...................................... 1,0 г; 
хлорид натрия................................ 8,5 г; 
вода........................................ 1000 см3. 
Приготовление. Компоненты или сухую готовую среду растворяют в кипящей воде. Устанавливают рН раствором гидрокенда натрия или раствором соляной кислоты подходящей концентрации так, чтобы после стерилизации его значение состаатяло (7,0±0.1) при 25 "С. Часть жидкости по 100- 300 см3 переносят в колбы или флаконы с завинчивающимися пробками вместимостью вдвое больше объема жидкости. Остаток жидкости переносят в пробирки, маленькие колбы или маленькие флаконы с завинчивающимися пробками так. чтобы после стерилизации каждая содержала по 9.0 см3. Стерилизуют жидкость для разбавления при температуре (121±1) 'С в течение 15 мин. 
5.4 Индольный реактив (реактив Ковача) 
Состав: 
/ышметиламннобензальдегил..................... 5,0 г; 
амиловый спирт............................... 25.0 см3; 
соляная кислота (р21> 1,18—1.19 г/см3).............. 25.0 см3. 
Приготовление. Альдегид растворяют в спирте при слабом нагревании на водяной бане (около 50—55 'С). Охлаждают и добавляют кислоту. Хранят при температуре около 4 "С в сосуде из темного стекла. Цвет реактива должен быть от светло-желтого до светло-коричневого. 
6 Аппаратура и стеклянная посуда 
6.1 Аппаратура 
6.1.1 Механическая мясорубка лабораторного типа, стерильная, с решеткой, диаметр отверстий которой не более 4 мм. 
6.1.2 Механический смеситель, работающий со скоростью не менее 8000 об/мин и не более 45000 об/мин. со стеклянными или металлическими смесительными стаканами разной вместимости и устойчивыми к условиям стерилизации. 
6.1.3 Аппаратура для стерилизации стеклянной посуды, смесительных стаканов, питательных сред и т. п. 
6.1.4 Термостат для выдерживания пробирок с посевами при температуре (ЗОН) "С. 
6.1.5 Водяная баня для выдерживания пробирок с посевами при температуре (44±0,1) "С. 
6.2 Стеклянная посуда 
Стеклянная посуда должна быть устойчивой к повторной стерилизации. 
6.2.1 Колбы и бактериологические пробирки полученного раствора (разведение 10 -) в другую пробирку, содержащую 9 см3 стерильной жидкости для разбавления, не касаясь пипеткой поверхности раствора. 
8.3.5 Жидкости хорошо перемешивают новой стерильной пипеткой. Операции повторяют до тех пор. пока не получат разведение Ю-6. 
8.4 Предполагаемые колнформные бактерии 
8.4.1 Посев 
Переносят новой стерильной пипеткой 6 порций по I см* гомогената (разделяя их на две трехкратные повторности) и в трехкратной повторности по 1 см1 каждого из пяти последующих разведений (8.3.3—8.3.5) двух серий разведений в пробирки, содержащие по 10 см' селективного бульона одинарной концентрации (5.2.16); начинают посев с наибольшего разведения гомогената и постепенно переходят к наименьшему, предварительно перемешивая содержимое пробирок трехкратным наполнением и выдуванием пипетки. 
Если ожидается выявить очень маленькое количество колиформных бактерий, то таким же образом переносят 6 порций по 10 см5 гомогената (две трехкратные повторности) в пробирки с 10 см* селективного бульона двойной концентрации (5.2.1а). используя стерильную пипетку вместимостью 10 см*. 
8.4.2 Инкубирование 
Пробирки, пригото&пенные по 8.4.1. выдерживают в термостате при температуре (30±1) "С в течение (48±2) ч. 
8.4.3 Интерпретация результатов 
После выдерживания в термостате пробирки с посевом просматривают и отмечают положительные. то есть тс, в которых наблюдается рост и образование газа, заполнившего не менее 1/10 объема трубки Дархема. 
8.5 Предполагаемые Escherichia coli 
8.5.1 Посев 
Используя стерильную пипетку вместимостью 1 см' для каждой пробирки, делают посев 1 капли культуры из положительных пробирок с предполагаемыми колиформными бактериями (8.4.3) в пробирку с 10 см' бульона одинарной концентрации (5.2.16) и в пробирку с 10 см* триптоповой волы, предварительно подогревая среды до 44 "С. 
8.5.2 Инкубирование 
Пробирки, приготовленные по п. 8.5.1, выдерживают на водяной бане при температуре (44±0.1) "С в течение 48 ч. 
8.5.3 Интерпретация результатов 
8.5.3.1 Образование газа 
Пробирки, содержащие бульон с посевом, после инкубирования в течение 48 ч просматривают. 
Регистрируют как положительные те пробирки, в которых наблюдается рост и образование газа, заполнившего не менее 1/10 объема трубки Дархема. 
8.5.3.2 Образование индола 
В пробирки, содержащие триптоновую воду с посевом, после инкубирования в течение 48 ч добавляют 0,5 см' индольного реактива, хорошо встряхивают и исследуют по истечении I мин. 
Красное окрашивание спиртового слоя указывает на присутствие индола. 
Регистрируют как положительные тс пробирки, в которых образовался индол. 
9 Обработка результатов 
9.1 Предполагаемые колнформные бактерии 
9.1.1 По количеству положительных пробирок с предполагаемыми колиформными бактериями (8.4.3) для различных разведений рассчитывают наиболее вероятное число (НВЧ) этих микроорганизмов на I г мяса или мясного продукта, как указано в 9.1.2—9.1.4. 
9.1.2 Для расчета НВЧ выбирают три последовательных разведения в соответствии с одним из следующих правил: 
а) когда есть разведение, дающее три положительные пробирки, выбирают наибольшее разведение (наименьшей концентрации), дающее три положительные пробирки, и два последующих разведения (концентрацией 1/10 и 1/100 выбранного разведения). 
Если последующие разведения оказались недостаточными в сравнении с наибольшим, дающим три положительные пробирки, выбирают три наибольших разведения серии;
б) когда нет разведения, даюшего три положительные пробирки выбирают три наибольших разведения серии; 
в) особый случай - когда более одного из трех разведений, выбранных по правилам, указанным в подпунктах а и б, не дали положительных пробирок. 
Выбирают из этих разведений наименьшее (наибольшей концентрации), не дающее положительных пробирок, и два последующих разведения серии (концентрацией 1/10 и 1/100 выбранного разведения), за исключением того случая, когда положительные пробирки обнаружены на уровне исходного разведения пробы. В последнем случае необходимо выбрать первые три разведения для расчета НВЧ, даже если эти серии включают два разведения, не дающих положительные пробирки. 
9.1.3 Язя определения значения НВЧ предполагаемых колнформных бактерий на 1 г мяса или мясного продукта умножить показатель НВЧ, приведенный в таблице (см. приложение), на значение, обратное наименьшему разведению. 
Если выбранное наименьшее разведение соответствует пробиркам со средой двойной концентрации и посевом 10 см3, показатель НВЧ следует разделить на 10. 
9.1.4 Рассчитывают среднее значение результатов, полученных для каждой серии разведений. 
9.2 Предполагаемые Escherichia coli 
9.2.1 По количеству положительных пробирок с предполагаемыми колиформными бактериями, в которых отмечено образование газа и образование индола, в различных разведениях рассчитывают НВЧ этих микроорганизмов на 1 г мяса или мясного продукта, как указано в 9.1.2—9.1.4 (при этом читать вместо «колиформные бактерии» «Escherichia coli»), 
9.3 Запись результатов 
Результат записывают как НВЧ предполагаемых колиформных бактерий (или Escherichia coli) на 1 г мяса или мясного продукта. 
При значении показателя НВЧ более 100 микроорганизмов на 1 г. результат выражают как число от 1.0 до 9.9, умноженное на 10 в соответствующей степени (например среднее число 15000 записывается как 1.5 К)'). При значении НВЧ от 0.3 до 100, результат выражают в соответствии с расчетом. При значении НВЧ меньше 0,3 при использовании методики для малого количества колиформных бактерий (S.4.1). результат выражают следующим образом: предполагаемые колиформные бактерии (или предполагаемые Escherichia coli) не были обнаружены в 1 г мяса или мясного продукта. 
10 Отчет об испытаниях 
В отчете должны быть указаны используемый метод и полученный результат, а также все условия, не оговоренные в настоящем стандарте или считающиеся необязательными, а также те, которые могли повлиять на результат. 
В отчете должны быть приведены все детали, необходимые для полной идентификации пробы.