***

наш журнал - это подспорье работникам предприятий пищевой промышленности, производителям и поставщикам оборудования, сырья и ингредиентов

воскресенье, 7 апреля 2013 г.

ГОСТ Р 51198-98: Мясо и мясные продукты. Метод определения L-(+)-глутаминовой кислоты

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 
МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ 
Метол определения Ь-(+)-глутамииовой кислоты 
Дата введения 2000-01-01 
1 Область применения 
Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные продукты н устанавливает метод определения 1.-(+)-глутамнновоЙ кислоты. 
2 Нормативные ссылки 
ГОСТ 9793—74 Продукты мясные. Методы определения влаги 

ГОСТ Р 51447—99 (ИСО 3100-1—91) Мясо и мясные продукты.Методы отбора проб 
3 Определение 
Массовая доля 1--(+)-глутаминовой кислоты — массовая доля 1_-(+)-глутаминовоЙ кислоты, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в процентах. 
4 Сущность метода 
1_-(+)-глутами110вую кислоту экстрагируют из пробы продукта, взятой на испытание, ледяным раствором хлорной кислоты. Смесь иенгрифугируют. фильтруют и доводят активную кислотность фильтрата до требуемого значения. Проводят ферментативное преобразование Ь-(+)-глугамата в а-кетоглутарат в ходе реакции с никотипамидадеииндипуклеотшюм (НАД) в присутствии глутамат-легидрогеназы (ГДГ): 
ГДГ 
[_-(+)-глугамат + НАД* +Н;0 НАД* + формазан. 
Измеряют массовую долю образовавшегося формазана на спектрофотометре при длине волны 492 им. 
5 Реактивы 
Все реактивы должны быть аналитического качества (не ниже х. ч.). Все растворы, кроме растворов неорганических соединений (5.1 и 5.2), должны храниться в закрытой посуде из темного стекла, тщательно вымытой и пропаренной или стерилизованной. 
Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть деминерализованной или бидистиллированной, полученной в стеклянном дистилляторе. 
Вола, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб, должна быть днетилл пропан ной или деминерализованной. 
Примечание — Однократно дистилл пропан пан вола может содержать ноны металлов, которые снижают активность ферментов, а деминерализованная иода может содержать микроорганизмы, увеличивающие нсспс пифическую фоновую фермен гати иную активность и искажающие результаты анализа. 
Препарат НАД должен содержать не менее 90 % основного вещества. 1--(+)-глутамииовая кислота должна содержать не менее 98 % основного вещества. Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов при условии соответствия качества реактивов требованиям настоящего стандарта. 
5.1 Раствор хлорной кислоты с (НСЮ4) ■ 1,0 моль/дм1 
8.6 см1 раствора хлорной кислоты массовой доли 70 % и плотности 1,67 г/см5 помещают в черную колбу вместимостью 100 см' и доводят объем раствора до метки водой.
Примечание — При использовании хлорной кислоты меньшей массовой доли провалят перерасчет объема кислоты, используемой дли осаждении белков. 
5.2 Раствор гнлроксила калия с (КОН) = 2 моль/дм' 
Растворяют 56.1 г гилроксида калия (КОН) в воде, доводят объем растиора до 500 см'. 
5.3 Буферный раствор активной кислотности 8,6 рН 
5.3.1 Растворяют 1,86 г гидрохлорида три этанол а ми на в воде, доводят активную кислотность раствора до 8,6 рН раствором гилроксида калия (5.2). используя хзя измерений рН-метр. Затем добавляют 0.68 г октилфенолдекаэтиленгликолевого эфира (например. Тритон X = 100) и доводят объем раствора до 100 см' водой. 
5.3.2 Растворяют 0,86 г лвузамешенного фосфорнокислого калия (К:НРОл) и 0.007 г одноза-мешенного фосфорнокислого калия (КН.Р04> в воде и доводят объем раствора до 100 см'. 
5.3.3 Смешивают 20 см' раствора по 5.3.1 и 5 см' раствора по 5.3.2. Раствор хранят при температуре 4 *С. 
5.4 Раствор НАД 
Навеску НАД массой 0,025 г растворяют в 5,0 см' волы в небольшой колбе со шлифом, колбу закрывают пробкой. 
Раствор устойчив не менее 1 мес при температуре 4 "С. 
5.5 Раствор Йодоннтротетразолия [2-(р-йодофеиил)-3-(р-1Ш1рофснил)-5-феннлтетразолия| хлорида (ИНТ-хлорнла) 
Растворяют 0,030 г ИНТ-хлорида в 50 см' волы, колбу закрывают пробкой. Раствор устойчив не менее 2 мес при температуре 4 "С в темноте. 
5.6 Раствор ЛАДГ 
Растворяют 0,003 г лиофильно высушенной липоаминлегидрогеиазы в I см' воды. Раствор устойчив не менее трех недель при температуре 4 "С. 
5.7 Раствор ГДГ 
Используют раствор глютаматдегидрогеназы концентрации 10 мг/см\ свободный от сульфата аммония. этиле1щиаминтетрауксусноЙ кислоты н глутачиназы, поставляемый в готовом виде (например в расфасовке по 1,0 см'), удельной активностью не менее 900 Е/см3. 
Раствор устойчив не менее 12 мес при температуре 4 "С. 
5.8 Стандартный раствор Ь-(+)-глутамнновой кислоты 
Растворяют 0,050 г 1.-(+)-глутамнновой кислоты в 25 см' воды. Активную кислотность раствора устанавливают 7,0 рН раствором гилроксида калия (5.2), после чего доводят объем раствора до 50 см'. 
Раствор хранят при температуре 4 'С и непосредственно перед использованием разводят водой и соотношении объемов I : 49. 
6 Средства контроля и вспомогательные устройства 
Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1 — 6.11. 
6.1 Мясорубка механическая лабораторная, снабженная перфорированной пластинкой с отверстиями диаметром не более 4 мм. 
6.2 Миксер лабораторный. 
6.3 Цоприфугл лабораторная с пробирками вместимостью 50 или 100 см'. 
6.4 Иономер или рН-метрлиапазоном измерений от I до 14 рН и допускаемой погрешностью ± 0,05 рН. 
6.5 Фильтры бумажные гофрированные диаметром 15 см. 6.6 Колбы мерные вместимостью НЮ и 250 см' и допускаемой относительной погрешностью ± 0,2 %. 
6.7 Дозаторы пнпеточные объемами доз 25, 50 и 100 см' и относительной погрешностью дозирования 1 1 %. 
6.8 Пипетки градуированные вместимостью 0.05; 0,2; 0,5 и 2,5 см' и допускаемой относительной погрешностью ± 1 %. 
6.9 Шпатели пластиковые или палочки стеклянные для перемешивания содержимого кюветы при проведении фотометрических измерений. 
6.10 Спектрофотометр (фотометр) со следующими техническими характеристиками: спектральный интервал — не более 10 им: интервал измерений оптической плотности — от 0.000 до 2,000; погрешность установки длины волны — ± 3 им; среднее квадратическое отклонение случайной составляющей погрешности измерений — не более 0,15 %. 
6.11 Кюветы фотометрические толщиной поглошаюшего слоя 10 мм. 
6.12 Термометр жидкостный стеклянным с интервалом измерений от Одо 100 'С, допускаемой погрешностью измерений 1 2 'С. 
6.13 Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 200 г и допускаемой погрешностью ± 0,001 г. 
7 Порядок подготовки к проведению измерений 
7.1 Отбор проб - по ГОСТ Р 51447. 
7.2 Пробу массой не менее 200 г, полученную из репрезентативной выборки, хранят в условиях, предотвращающих порчу и изменение состава. 
8 Порядок проведения измерений 
8.1 Подготовка пробы к проведению измерений 
Образен пробы гомогенизируют, дважды пропуская через мясорубку (6.1) и тщательно перемешивая. 
Образец хранят не более 24 ч в заполненном доверху и герметически закрытом контейнере таким образом, чтобы предотвратить порчу или изменение состава. 
8.2 Навеска для проведения анализа 
Взвешивают приблизительно 50 г исследуемого образца с точностью до 10 мг и помещают навеску образна в лабораторный миксер (6.2). 
8.3 Приготовление экстракта 
8.3.1 К навеске образца в лабораторном миксере добавляют 100 см' охлажденного льдом раствора хлорной кислоты (5.1) и гомогенизируют. 
8.3.2 Часть гомогеннзата помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют 10 мин при угловой скорости 3000 мин затем, осторожно отодвинув слой жира, отфильтровывают суперна-тант через гофрированный бумажный фильтр (6.5) в коническую колбу вместимостью 200 см-. Первые 10 см5 фильтрата выбрасывают. 
8.3.3 50 см' подготовленного раствора, который может быть слегка мутным, переносят в стаканчик вместимостью 100 см' и доводят активную кислотность раствора до 10 рН раствором гмдроксила калия (5.2). 
8.3.4 Количественно переносят содержимое стаканчика в мерную колбу вместимостью 100 см1 и доводят объем раствора до метки водой. 
8.3.5 Раствор охлаждают в ледяной бане 20 мин и фильтруют через гофрированный бумажный фильтр (6.5), отбросив первые 10 см' фильтрата. 
8.3.6 25 см' фильтрата переносят в мерную колбу вместимостью 250 см' и доводят объем фильтрата до метки водой. 
Примечание — Ооьсм фильтрата выбирают так. чгобы концентрации К*-)-глутамино1юй кислоты была приблизительно 0.030 г/дм*. 
8.4 Определение 
8.4.1 Температуру растворов по 5.3 и 8.3.6 доводят до 20—25 "С. Для проведения ферментативной реакции берут две фотометрические кюветы (6.11), в каждую из которых пипеточным дозатором (6.5) добавляют: 
- 2,50 см' буферного раствора (5.3);  - 0,20 см* раствора НАД (5.4): 
- 0,20 см3 раствора ИНТ (5-5) и 
- 0,05 см' раствора лнноаминдепирогеиаза (5.6). 
Затем в олну кювету вносят 0,50 см3 экстракта (8.3.6). получая исследуемый раствор, а во вторую — 0,50 см1 воды, получая ко]гтролышП раствор. 
Растворы в кюветах перемешивают пластиковыми шпателями или стеклянными палочками (6.9) и измеряют оптические плотности относительно воздуха при длине волны 492 нм: Ах — оптическая плотность исследуемого раствора, Аы — оптическая плотность контрольного раствора. 
Температура растворов должна быть от 20 до 25 *С. 
8.4.2 В каждую кювету вносят по 0,05 см* раствора ГДГ (5.7) и тщательно смешивают с содержимым, используя шпатель или стеклянную палочку (6.9). 
Растворы выдерживают 15 мин. Затем измеряют оптические плотности при длине волны 492 нм, повторяя измерения через каждые 2 мин до достижения постоянных значений. 
Строят графики зависимости оптических плотностей растворов от времени и экстраполируют их на момент внесения фермента ГДГ (приложение .А). 
Получают экстраполированные значения оптических плотностей исследуемого {А2) и контрольного (Л_ч) растворов. 
8.4.3 Определяют микромолярный коэффициент оптической плотности формазанат повторяя операиии по 8.4.1 и 8.4.2, но заменяя 0,5 см5 экстракта в первой фотометрической кювете па 0,5 су3 стандартного раствора 1_-(+)-глутаминовоЙ кислоты (5.8). 
Получают следующие значения оптических плотностей: 
- А \ — стандартного раствора 1_Ч+)-глугаминовой кислоты; 
- А\к — контрольного раствора; 
- А 2 — стандартного раствора Ц+|-г.тутамнновой кислоты; 
- А '2к — контрольного раствора. 
8.5 Выполняют два параллельных определения в двух пробах из одного и того же образца (8.1). 
9 Правила обработки результатов измерений 9.1 Метод расчета 
Массовую долю 1_~(+)-глутамнновой кислоты в пробе X. %. вычисляют по формуле 
147,1 — молярная масса Ь*(+)-глутаминовоП кислоты; 
Л/ — массовая доля влаги в пробе, определенная по ГОСТ 9793: т — масса навески (8.2), г; 
К —объем фильтрата, взятый на определение (8.3.6), см3; 
к — микромолярный коэффициент оптической плотности формазана при длине волны 492 нм, см2/мкмоль, рассчитанный по формуле 
где Л А * = (Л2 ~ А\) - - Ли). 
За результат измерений принимают среднеарифметическое значение результатов двух парал- 
лельных определений при условии выполнения 9.2. Результат определяют с точностью 0,01 %. 9.2 Сходимость 
Относительное расхождение результатов двух параллельных определений, выполненных в одной лаборатории, не должно превышать 10 % среднеарифметического значения.  10 Оформление результатов измерений 
В отчете об испытании должны быть указаны: 
- используемый метод; 
- полученные результаты; 
- любые условия проведения испытаний, не установленные данным стандартом и касающиеся подробностей, которые могут повлиять на конечный результат. 
В отчете должны быть все данные, необходимые для полной идентификации пробы.