ГОСТ Р 53514-2009: Мясо и мясные продукты. Иммунопреципитационный метод определения массовой доли животного (свиного, говяжьего, бараньего) белка
Дата введения — 2010—07—01
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные полуфабрикаты и устанавливает иммунопреципитационный метод определения массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка.
Стандарт предназначен дпя идентификации свиного, говяжьего или бараньего белков в составе мясного сырья и мясных продуктов, не подвергнутых тепловой обработке.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р 50444—92 Приборы, аппараты и оборудование медицинские. Общие технические усло-
вия
ГОСТ Р 51447—99 (ИСО 3100-1—91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб ГОСТ 12.1.004—91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.007—76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019—79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ 12.4.009—83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника дпя защиты объектов. Основные виды. Размещение и обспуживание
ГОСТ 1770—74 Посуда мерная пабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 9656—75 Реактивы. Кислота борная. Технические условия
ГОСТ 10652—73 Реактивы. Соль динатриевая этилендиамин-Ы, N. Ы', Ы'-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б). Технические условия
ГОСТ 20903—75 Кюветы прямоугопьные кварцевые для спектрофотометров. Основные размеры. Технические требования
ГОСТ 25011—81 Мясо и мясные продукты. Методы определения белка
ГОСТ 25336—82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26678—85 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то попожение. в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссыпку.
3 Сущность метода
Метод основан на проявлении особых свойств защитных систем высших позвоночных — вырабатывать новые сывороточные белки (антитела) при введении в организм посторонних для него веществ (антигенов). Используют диагностическую преципитирующую сыворотку к конкретному виду животного белка, вызывающую образование нерастворимого комплекса антиген-антитело.
4 Диапазоны измерений и метрологические характеристики метода
4.1 Диапазон измерений массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка от 1 % до 85 %.
4.2 Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности 0,95 приведены в таблице 1.
Таблица 1
Наименование по«азателя Диапазон измерений массовой доли, % Границы относительной погрешности а. % Предел повторяемости Лл» * Предел воспроизводимости
Массовая доля животного белка. % От 1 до 85 включ. 30 24 38
5 Отбор проб
5.1 Отбор проб — по ГОСТ Р 51447.
5.2 Пробу хранят в холодильнике при температуре от 0 еС до 5 "С до полного завершения испытания в течение суток.
Допускается хранение проб при температуре от минус 20 "С до минус 10 °С в герметичной упаковке в течение одной недели с даты отбора проб на исспедование.
6 Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы
Спектрофотометр СФ-103 типа «Аквилон», обеспечивающий измерения в диапазоне длин волн от 200 до 900 нм по (1].
Кюветы кварцевые толщиной 1 см по ГОСТ 20903.
Весы лабораторные с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ±0,1 мг.
Микроизмельчитель тканей РТ-2 по (2) или гомогенизатор с частотой вращения 8000 — 24000 об/мин.
Центрифуга с регулируемой скоростью вращения до 8000 об/мин.
Пробирки центрифужные по ГОСТ 25336.
Аппарат встряхивающий.
Холодильник бытовой по ГОСТ 26678.
Дозатор пипеточный переменного объема по ГОСТ Р 50444 и [3].
Колбы мерные 2-го класса точности вместимостью 250 см3 по ГОСТ 1770.
Цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 250 см3 по ГОСТ 1770.
Воронки стеклянные ВД-1-100 ХС по ГОСТ 25336. Диагностическая сыворотка по (4].
Свинина, говядина, баранина с массовой долей белка по Кьельдалю не менее 18 % по ГОСТ 25011 для использования в качестве контрольного образца.
Соевый изолят с массовой долей белка по Кьельдалю не менее 85 % по ГОСТ 25011.
Кислота борная по ГОСТ 9656. ч.
2-амино-2(гидроксиметил)-1,3-пропандиол (ТРИС) с массовой долей основного вещества 99,9 %.
Соль динатриевая этилендиамин-N, N, N'. N'-тетрауксусной кислоты (трмлон Б) по ГОСТ 10652,
ч.д.а.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками, оборудования с техническими характеристиками и реактивов по качеству не ниже указанных в настоящем стандарте.
7 Подготовка к выполнению измерений
7.1 Приготовление растворов
7.1.1 Приготовление концентрированного буферного раствора
Навеску 2-амино-2(гидроксиметил)-1.3-пропандиола (ТРИС) массой 15,0 г и навеску трилона Б массой 1,5 г с помощью воронки переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3 и при перемешивании добавпяют 100 — 150 см3 дистиллированной воды. Полученный раствор перемешивают, в него добавляют постепенно 5,5 г борной кислоты и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Раствор тщательно перемешивают до растворения осадка.
7.1.2 Приготовление рабочего буферного раствора
В мерную колбу вместимостью 250 см3 с помощью мерного цилиндра вносят 50 см3 концентрированного буферного раствора. Раствор в колбе доводят до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают и получают рабочий буферный раствор, содержащий в 1 см3 0,012 г ТРИС. 0,001 г трилона Б и 0.0044 г борной кислоты.
7.2 Приготовление испытуемого экстракта пробы
7.2.1 Навеску пробы массой 5,0 г перемешивают с 5 см3 рабочего буферного раствора в гомогенизаторе в течение 5 мин и выдерживают смесь 1 ч при температуре от 5 вС до 8 °С, периодически встряхивая в течение 5 мин.
7.2.2 Смесь центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 мин. Для измерений используют верхний прозрачный слой, содержащий экстракт анализируемого белка.
7.3 Приготовление двухкомпонентных модельных мясорастительных смесей для построения градуировочного графика
Навески по 25.0 г свинины (говядины или баранины) смешивают с навесками 400,0 г и 100,0 г соевого изолята и навески по 100,0 г свинины (говядины или баранины) смешивают с навесками 100,30,15 и 3.5 г соевого изолята.
Каждую смесь перемешивают на микроизмельчителе тканей в течение 30 мин до образования гомогенной массы. Допускается использование уменьшенных навесок в случае приготовления смеси путем растирания в ступке. Попучают двухкомпонентные модельные мясорастительные смеси, массовая доля животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в которых относительно массовой доли общего белка равна 1,3 %: 5,0 %; 17.5 %; 41,4 %; 58,5 % и 86,1 %.
Предварительно определяют массовую долю общего белка методом Кьельдаля по ГОСТ 25011.
8 Проведение измерений
8.1 Измерение испытуемых растворов
8.1.1 20 мм3 экстракта пробы смешивают с 400 мм3 рабочего буферного раствора, измеряют фоновое поглощение на спектрофотометре при /. = 405 нм (контроль), затем добавляют 20 мм3 диагностической сыворотки, содержащей антитела, к опредепяемому виду белка, проводят реакцию осаждения при постоянном встряхивании смеси в течение 1 ч. Для выявления специфического бепка измеряют оптическую плотность среды в кювете с толщиной оптического слоя 1 см. 8.1.2 Для подтверждения действия диагностической преципитирующей сыворотки на животный белок параллельно проводят анализ контрольного образца, не содержащего определяемый белок.
8.1.3 Для каждого испытуемого раствора проводят два измерения, по результатам которых с помощью градуировочного графика находят средние значения массовой концентрации животного (говяжьего. свиного, бараньего) белка в этих растворах.
8.2 Построение градуировочного графика
Градуироаочный график строят по результатам двукратного определения в соответствии с 8.1.1 массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в двухкомпонентных модельных мясо-растительных смесях, содержащих животный белок и добавки растительного соевого белка, соответственно в таблицах 2—4.
Таблице 2
Оптическая плотность среды <О404) при 406 им 0.070 0.075 0.100 0.158 0.200 0.260
Массовая доля свиного бели в образце С, % от общего белка 1.3 5.0 17.5 41.4 58.5 86.1
Таблица 3
Оптическая плотность среды (О414} при 405 им 0.065 0.085 0.110 0.135 0.155 0.175 0.200 0.225 0.250 0.275
Массовая доля говяжьего белка в образце С, % от общего белка 1 10 20 30 40 50 60 70 80 90
Таблица 4
Оптическая плотность среды (Оли») при 405 нм 0.060 0.090 0.115 0.130 0.160 0.170 0.190 0.23 0 0.260 0.280
Массовая доля бараньего белка в образце С. 44 от общего белка 11 110 220 330 440 550 660 770 880 990
9 Обработка результатов
9.1 Массовую долю животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка Бж, %. относительно массовой доли общего белка, вычисляют по формупе
где С — среднеарифметическое значение массовой допи животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в испытуемой пробе, %; Б, — массовая доля общего белка в анализируемом образце, определенная методом Кьельдаля. %. 9.2 За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое из двух парап-лвльных определений, если выполняется условие приемлемости:
1(2|С, - С2|)/(С1 + С2)1 ■ 100 ¿/-аги, (2)
где С, и С2 — результаты параплельных определений массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка, опредепенные по градуировочному графику. %; готм — предеп повторяемости, приведенный в табпице 1. Результат вычислений округляют до целого числа. 10 Требования безопасности
10.1 При подготовке и проведении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.
10.2 Помещение, в котором проводят измерения, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу необходимо проводить, соблюдая правила личной гигиены и противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004, и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.
10.3 При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТ 12.1.019.
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные полуфабрикаты и устанавливает иммунопреципитационный метод определения массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка.
Стандарт предназначен дпя идентификации свиного, говяжьего или бараньего белков в составе мясного сырья и мясных продуктов, не подвергнутых тепловой обработке.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р 50444—92 Приборы, аппараты и оборудование медицинские. Общие технические усло-
вия
ГОСТ Р 51447—99 (ИСО 3100-1—91) Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб ГОСТ 12.1.004—91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.007—76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019—79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
ГОСТ 12.4.009—83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника дпя защиты объектов. Основные виды. Размещение и обспуживание
ГОСТ 1770—74 Посуда мерная пабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 9656—75 Реактивы. Кислота борная. Технические условия
ГОСТ 10652—73 Реактивы. Соль динатриевая этилендиамин-Ы, N. Ы', Ы'-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б). Технические условия
ГОСТ 20903—75 Кюветы прямоугопьные кварцевые для спектрофотометров. Основные размеры. Технические требования
ГОСТ 25011—81 Мясо и мясные продукты. Методы определения белка
ГОСТ 25336—82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26678—85 Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда. Общие технические условия
Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то попожение. в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссыпку.
3 Сущность метода
Метод основан на проявлении особых свойств защитных систем высших позвоночных — вырабатывать новые сывороточные белки (антитела) при введении в организм посторонних для него веществ (антигенов). Используют диагностическую преципитирующую сыворотку к конкретному виду животного белка, вызывающую образование нерастворимого комплекса антиген-антитело.
4 Диапазоны измерений и метрологические характеристики метода
4.1 Диапазон измерений массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка от 1 % до 85 %.
4.2 Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности 0,95 приведены в таблице 1.
Таблица 1
Наименование по«азателя Диапазон измерений массовой доли, % Границы относительной погрешности а. % Предел повторяемости Лл» * Предел воспроизводимости
Массовая доля животного белка. % От 1 до 85 включ. 30 24 38
5 Отбор проб
5.1 Отбор проб — по ГОСТ Р 51447.
5.2 Пробу хранят в холодильнике при температуре от 0 еС до 5 "С до полного завершения испытания в течение суток.
Допускается хранение проб при температуре от минус 20 "С до минус 10 °С в герметичной упаковке в течение одной недели с даты отбора проб на исспедование.
6 Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы
Спектрофотометр СФ-103 типа «Аквилон», обеспечивающий измерения в диапазоне длин волн от 200 до 900 нм по (1].
Кюветы кварцевые толщиной 1 см по ГОСТ 20903.
Весы лабораторные с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания не более ±0,1 мг.
Микроизмельчитель тканей РТ-2 по (2) или гомогенизатор с частотой вращения 8000 — 24000 об/мин.
Центрифуга с регулируемой скоростью вращения до 8000 об/мин.
Пробирки центрифужные по ГОСТ 25336.
Аппарат встряхивающий.
Холодильник бытовой по ГОСТ 26678.
Дозатор пипеточный переменного объема по ГОСТ Р 50444 и [3].
Колбы мерные 2-го класса точности вместимостью 250 см3 по ГОСТ 1770.
Цилиндр мерный 2-го класса точности вместимостью 250 см3 по ГОСТ 1770.
Воронки стеклянные ВД-1-100 ХС по ГОСТ 25336. Диагностическая сыворотка по (4].
Свинина, говядина, баранина с массовой долей белка по Кьельдалю не менее 18 % по ГОСТ 25011 для использования в качестве контрольного образца.
Соевый изолят с массовой долей белка по Кьельдалю не менее 85 % по ГОСТ 25011.
Кислота борная по ГОСТ 9656. ч.
2-амино-2(гидроксиметил)-1,3-пропандиол (ТРИС) с массовой долей основного вещества 99,9 %.
Соль динатриевая этилендиамин-N, N, N'. N'-тетрауксусной кислоты (трмлон Б) по ГОСТ 10652,
ч.д.а.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками, оборудования с техническими характеристиками и реактивов по качеству не ниже указанных в настоящем стандарте.
7 Подготовка к выполнению измерений
7.1 Приготовление растворов
7.1.1 Приготовление концентрированного буферного раствора
Навеску 2-амино-2(гидроксиметил)-1.3-пропандиола (ТРИС) массой 15,0 г и навеску трилона Б массой 1,5 г с помощью воронки переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3 и при перемешивании добавпяют 100 — 150 см3 дистиллированной воды. Полученный раствор перемешивают, в него добавляют постепенно 5,5 г борной кислоты и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Раствор тщательно перемешивают до растворения осадка.
7.1.2 Приготовление рабочего буферного раствора
В мерную колбу вместимостью 250 см3 с помощью мерного цилиндра вносят 50 см3 концентрированного буферного раствора. Раствор в колбе доводят до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают и получают рабочий буферный раствор, содержащий в 1 см3 0,012 г ТРИС. 0,001 г трилона Б и 0.0044 г борной кислоты.
7.2 Приготовление испытуемого экстракта пробы
7.2.1 Навеску пробы массой 5,0 г перемешивают с 5 см3 рабочего буферного раствора в гомогенизаторе в течение 5 мин и выдерживают смесь 1 ч при температуре от 5 вС до 8 °С, периодически встряхивая в течение 5 мин.
7.2.2 Смесь центрифугируют при 5000 об/мин в течение 20 мин. Для измерений используют верхний прозрачный слой, содержащий экстракт анализируемого белка.
7.3 Приготовление двухкомпонентных модельных мясорастительных смесей для построения градуировочного графика
Навески по 25.0 г свинины (говядины или баранины) смешивают с навесками 400,0 г и 100,0 г соевого изолята и навески по 100,0 г свинины (говядины или баранины) смешивают с навесками 100,30,15 и 3.5 г соевого изолята.
Каждую смесь перемешивают на микроизмельчителе тканей в течение 30 мин до образования гомогенной массы. Допускается использование уменьшенных навесок в случае приготовления смеси путем растирания в ступке. Попучают двухкомпонентные модельные мясорастительные смеси, массовая доля животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в которых относительно массовой доли общего белка равна 1,3 %: 5,0 %; 17.5 %; 41,4 %; 58,5 % и 86,1 %.
Предварительно определяют массовую долю общего белка методом Кьельдаля по ГОСТ 25011.
8 Проведение измерений
8.1 Измерение испытуемых растворов
8.1.1 20 мм3 экстракта пробы смешивают с 400 мм3 рабочего буферного раствора, измеряют фоновое поглощение на спектрофотометре при /. = 405 нм (контроль), затем добавляют 20 мм3 диагностической сыворотки, содержащей антитела, к опредепяемому виду белка, проводят реакцию осаждения при постоянном встряхивании смеси в течение 1 ч. Для выявления специфического бепка измеряют оптическую плотность среды в кювете с толщиной оптического слоя 1 см. 8.1.2 Для подтверждения действия диагностической преципитирующей сыворотки на животный белок параллельно проводят анализ контрольного образца, не содержащего определяемый белок.
8.1.3 Для каждого испытуемого раствора проводят два измерения, по результатам которых с помощью градуировочного графика находят средние значения массовой концентрации животного (говяжьего. свиного, бараньего) белка в этих растворах.
8.2 Построение градуировочного графика
Градуироаочный график строят по результатам двукратного определения в соответствии с 8.1.1 массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в двухкомпонентных модельных мясо-растительных смесях, содержащих животный белок и добавки растительного соевого белка, соответственно в таблицах 2—4.
Таблице 2
Оптическая плотность среды <О404) при 406 им 0.070 0.075 0.100 0.158 0.200 0.260
Массовая доля свиного бели в образце С, % от общего белка 1.3 5.0 17.5 41.4 58.5 86.1
Таблица 3
Оптическая плотность среды (О414} при 405 им 0.065 0.085 0.110 0.135 0.155 0.175 0.200 0.225 0.250 0.275
Массовая доля говяжьего белка в образце С, % от общего белка 1 10 20 30 40 50 60 70 80 90
Таблица 4
Оптическая плотность среды (Оли») при 405 нм 0.060 0.090 0.115 0.130 0.160 0.170 0.190 0.23 0 0.260 0.280
Массовая доля бараньего белка в образце С. 44 от общего белка 11 110 220 330 440 550 660 770 880 990
9 Обработка результатов
9.1 Массовую долю животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка Бж, %. относительно массовой доли общего белка, вычисляют по формупе
где С — среднеарифметическое значение массовой допи животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка в испытуемой пробе, %; Б, — массовая доля общего белка в анализируемом образце, определенная методом Кьельдаля. %. 9.2 За окончательный результат измерения принимают среднеарифметическое из двух парап-лвльных определений, если выполняется условие приемлемости:
1(2|С, - С2|)/(С1 + С2)1 ■ 100 ¿/-аги, (2)
где С, и С2 — результаты параплельных определений массовой доли животного (говяжьего, свиного, бараньего) белка, опредепенные по градуировочному графику. %; готм — предеп повторяемости, приведенный в табпице 1. Результат вычислений округляют до целого числа. 10 Требования безопасности
10.1 При подготовке и проведении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.
10.2 Помещение, в котором проводят измерения, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу необходимо проводить, соблюдая правила личной гигиены и противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004, и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.
10.3 При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТ 12.1.019.
Комментарии